中国仓鼠卵巢细胞中表达的牛维生素k依赖性γ -羧化酶的体内外功能研究。

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Rehemtulla A, Roth DA, Wasley LC, Kuliopulos A, Walsh CT, Furie B, Furie BC, Kaufman RJ

中国仓鼠卵巢细胞中表达的牛维生素k依赖性γ -羧化酶的体内外功能研究。

中国科学院学报(自然科学版)1993年5月15日;90(10):411 -5。

PubMed ID

8506307 (PubMed视图

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摘要

凝血因子IX是一种丝氨酸蛋白酶，由于前肽的蛋白水解去除效率不高，以及多个氨基末端谷氨酸残基依赖维生素k的羧化，其在异源细胞中生物活性蛋白的高水平表达受到限制。我们在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中过表达维生素k依赖的γ -羧化酶cDNA，并监测其改善因子IX加工的能力。从牛肝脏维生素k依赖的γ -羧化酶的氨基酸序列分析中，利用简并寡核苷酸分离出3.5 kbp的牛cDNA，编码758个残基的开放阅读框。在COS-1和CHO细胞中表达cDNA可使微粒体制剂的体外γ -羧化酶活性分别提高17倍和16倍。针对预测肽序列培养的抗血清与部分纯化的牛肝脏制剂中的94 kda多肽以及稳定转染的CHO细胞发生反应。在体外，抗体反应性的量与增加的能力羧化肽底物相关。这些结果有力地支持了cDNA编码维生素k依赖的γ -羧化酶的结论。将γ -羧化酶表达载体瞬时转染到表达因子IX的CHO细胞中并不能提高分泌因子IX的特异性促凝活性。相比之下，转染编码前肽处理酶PACE(配对碱性氨基酸切割酶)的表达载体确实将分泌因子IX的特异性提高了3倍。这些结果表明，CHO细胞将分泌因子IX中的谷氨酸残基修饰为γ -羧化谷氨酸的能力不受维生素k依赖的γ -羧化酶的单独表达的限制。

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药物靶点

药物	目标	种类	生物	药理作用	行动
凝血因子IX(重组)	依赖维生素k的-羧化酶	蛋白质	人类	未知的	不可用	细节
凝血因子IX人	依赖维生素k的-羧化酶	蛋白质	人类	未知的	不可用	细节